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北蟲草液體菌種制作方法

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2019 07 01
諸城市利宇機械有限公司

 一,、培養(yǎng)基配方
    配方:玉米粉1%、葡萄糖2%,、蛋白胨1%,、酵母粉0.5%、磷酸二氫鉀0.1%,、水95.35%,、硫酸鎂0.05%,、維生素B1 10mg、PH值調(diào)至6.5左右,。
    二、制作培養(yǎng)方法
    1. 制作一級搖瓶種:將這些原料溶于水后裝在500毫升三角瓶中,,每個三角瓶裝量200毫升,,放入玻璃珠3粒左右,塞緊棉塞,,然后用4層紗布罩住棉塞,、瓶口扎緊,放在高壓滅菌鍋內(nèi)進行消毒,,待壓力表上升至0.5kg/cm2壓力時,,即放凈冷氣待指針降至0后,再關(guān)掉放氣閥門,,待溫度表指針逐漸上升至1.1kg/cm2后就開始保溫30分鐘后,,慢慢下降指針至0,然后開蓋冷卻至常溫,,再移入接種箱或超凈工作臺等待接種,。
    2. 接種方法:先把滅菌后的北蟲草液體菌種培養(yǎng)基移放在超凈工作臺上,并把北蟲草母種和接種勾,、酒精燈,、酒精棉球等接種物品也放在超凈工作臺上,工作服掛在接種室消毒,。然后在接種室點燃煙霧劑(用臭氧消毒器更好),,立即關(guān)閉所有門窗密閉消毒同時打開紫外線燈。待40min后,,將煙霧放凈,,關(guān)閉紫外線燈,接種人員就可進行接種,。接種的方法是穿好工作服,,打開超凈工作臺風(fēng)機,點燃酒精燈,,左手拿著母種試管對準火焰口,,右手拿著鐵勾在酒精燈火焰消毒3-5秒種后立即伸進母種試管內(nèi)把菌種分成5-7段,再用左手迅速將紗布瓶蓋打開,,右手立即把一段菌塊勾入瓶內(nèi)(每瓶接入5-6片0.5平方厘米大小菌種)速將瓶蓋按原樣蓋緊,。
    當(dāng)北蟲草菌種接好后,移入22-24℃恒溫培養(yǎng)室,,搖床震蕩發(fā)菌培養(yǎng),。搖床轉(zhuǎn)速140r/min,,經(jīng)過4-6天的發(fā)菌培養(yǎng),經(jīng)檢查北蟲草菌液的顏色開始清亮,、菌球密集,,瓶口聞有很濃的北蟲草氣味,可判斷為菌種優(yōu)良,。如發(fā)現(xiàn)發(fā)菌瓶內(nèi)濃度低,、氣味臭,并有五顏六色的菌液,,就是有雜菌污染,,堅決不能用。
    3. 制作二級搖瓶:培養(yǎng)基同一級,,用5000ml三角瓶裝量2000ml北蟲草液體菌種,,滅菌冷卻后把一級搖瓶種按10%無菌操作接入大搖瓶,22-24℃,,140r/min震蕩培養(yǎng)72小時后,,菌球大小均勻、密度80%以上,,菌液清亮,,氣味清香、無污染的即為合格菌種,。由于5000ml大搖瓶體積較大,,用手提高壓鍋放不下,用大鍋又太浪費,,為解決大搖瓶滅菌問題,,花山食用菌研究所研制了一款100升立式電加熱自控高壓滅菌鍋,一次可滅4個5000的大搖瓶,,同時,,研制了一次可搖5-7瓶5000ml大三角瓶的搖床,輕便,、無噪音,、耗能低。
    4. 菌種稀釋:發(fā)好的蟲草液體菌種接種前需要稀釋以擴大接種規(guī)模,。稀釋倍數(shù)依據(jù)接種的盤數(shù)按5-8倍稀釋,。用稀釋罐稀釋時,按液體罐空消,、實消操作規(guī)程:
    (A)發(fā)酵罐空消
    發(fā)酵罐空消(內(nèi)膽,、過濾器、管線的消毒)是對發(fā)酵罐進行設(shè)備消毒滅菌的過程,,對于放置一周不用的發(fā)酵罐或者是因為停電使空壓機(打氣泵)停止運轉(zhuǎn)的發(fā)酵罐都需要進行發(fā)酵罐的空消操作,,具體的操作方法:
    (1)關(guān)閉發(fā)酵罐,,除夾套排氣門外的所有閥門,擰緊發(fā)酵罐罐口蓋子,。 (2)啟動電源,,打開控制柜“滅菌”鍵,此時進入滅菌狀態(tài),。
    (3)當(dāng)溫度升到100℃夾套有蒸汽冒出時關(guān)閉夾套排氣閥門,,此時給夾套升溫升壓,當(dāng)夾套壓力達到0.05Mpa以上時,,緩慢打開夾套進過濾器閥門,打開過濾器尾閥門,。
    (4)當(dāng)過濾器冷凝水排放完畢有蒸汽冒出后微開過濾器尾閥門,,緩慢打開進氣閥門尾閥門,排放空氣管道內(nèi)的冷凝水,,冷凝水排放完畢后緩慢打開進氣閥門,,使得蒸汽慢慢進入罐體。
    (5)微開發(fā)酵罐排氣氣閥門,,緩慢將發(fā)酵罐內(nèi)的冷空氣排放出去,,在空消的整個過程中,控制發(fā)酵罐排氣閥門,,使得發(fā)酵罐排氣閥門有少量蒸汽流通,。
    (6)當(dāng)控制柜溫度顯示接近123℃,發(fā)酵罐罐內(nèi)壓力接近0.12Mpa時緩慢打開接種管道尾端,,將接種管道內(nèi)冷凝水排放完畢后,,保證尾端有少量蒸汽冒出保證蒸汽流通。
    (7)當(dāng)溫度達到123℃,,發(fā)酵罐壓力達到0.12Mpa時控制柜開始時間倒計時,,屏幕上顯示溫度和倒計時時間,當(dāng)?shù)褂嫊r時間為0時,,控制柜自動報警,,此時空消結(jié)束。
    (8)空消結(jié)束后,,關(guān)閉發(fā)酵罐加熱棒,,關(guān)閉夾套進過濾器閥門、發(fā)酵罐進氣閥門,、發(fā)酵罐接種閥門,、接種管道尾端閥門。微開發(fā)酵罐排氣閥門,、夾套排氣閥門,、發(fā)酵罐進氣閥門尾閥門,、使得夾套和發(fā)酵罐的壓力慢慢下降,當(dāng)過濾器壓力即將卸完時,,打開空壓機(打氣泵),,使得空氣流通過濾器,通過過濾器的空氣在發(fā)酵罐進氣閥門尾閥門排放掉,,流過過濾器的空氣對濾芯吹30min,,使得吹出的空氣無水分后備用。
    (B)發(fā)酵罐實消
    (1)定量加入清水后,,打開夾套排氣閥門和發(fā)酵罐排氣閥門,,啟動電源,按下“滅菌”鍵,,此時進入滅菌狀態(tài),。
    (2)當(dāng)溫度升到100℃夾套有蒸汽冒出時關(guān)閉夾套排氣閥門,發(fā)酵罐排氣閥門微開,,整個發(fā)酵罐實消過程中控制發(fā)酵罐排氣閥門的開度,,保證發(fā)酵罐罐內(nèi)冷空氣排凈并保證有蒸汽流通。
    (3)當(dāng)控制柜顯示屏幕上顯示溫度123℃,,壓力表壓力0.12 Mpa時控制柜自動倒計時,,屏幕上可顯示發(fā)酵罐溫度和倒計時時間,當(dāng)時間倒計時為0時,,控制柜自動報警,,打開夾套排氣閥門,發(fā)酵罐排氣閥門,,使得夾套和發(fā)酵罐壓力緩慢下降(發(fā)酵罐壓力不能掉零)此時發(fā)酵罐滅菌結(jié)束,。
    注意:計時開始時和滅菌即將結(jié)束時需要對發(fā)酵罐進行排水操作,微開接種閥門,,有少量氣,、水排出即可,每次排水時間3-5min,。排水的目的一是排出閥門處的生水,;二是對閥門管路進行滅菌。
    定量加入清水123℃滅菌40分鐘,,冷卻至20度,,使用空壓機保持正壓,無菌操作方法倒入搖瓶種,,無菌空氣攪拌均勻,,罐內(nèi)升壓至0.5mpa接種(接種與液體接種操作相同),接種量50-60ml,。接種后18-21℃避光培養(yǎng),,好的菌種7-10天封滿料面,。
     (4)相關(guān)設(shè)備:為實現(xiàn)北蟲草的工廠化周年生產(chǎn),食用菌研究所研制了整套工廠化生產(chǎn)工藝流程及配套設(shè)備,,擇其主要簡要介紹:
     ①紅外線定位定量自動裝盤機,,自動定量加料加水傳送,節(jié)約人工,、效率高,;
     ②5-50立方高壓滅菌柜,煤,、電,、柴,自燒等各種型號,;
     ③100級無菌凈化接種線,,保障了接種高成功率;
     ④不銹鋼電加熱自控液體菌種發(fā)酵罐,,既可作稀釋罐也可發(fā)酵培養(yǎng)。

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