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  高壓滅菌的原理是：在密閉的蒸鍋內(nèi)，其中的蒸汽不能外溢,，壓力不斷上升,，使水的沸點不斷提高，從而鍋內(nèi)溫度也隨之增加,。在0.1MPa的壓力下,，鍋內(nèi)溫度達121℃,。在此蒸汽溫度下,，可以很快殺死各種細菌及其高度耐熱的芽孢。

  注意:完全排除鍋內(nèi)空氣,，使鍋內(nèi)全部是水蒸氣,，滅菌才能徹底。高壓滅菌放氣有幾種不同的做法,，但目的都是要排凈空氣,，使鍋內(nèi)均勻升溫，保證滅菌徹底,。常用方法是：關(guān)閉放氣閥,，通電后，待壓力上升到0.05MPa時,，打開放氣閥,，放出空氣，待壓力表指針歸零后,，再關(guān)閉放氣閥,。關(guān)閥再通電后，壓力表上升達到0.1MPa時,開始計時，維持壓力0.1～0.15MPa 20分鐘,。

  到達保壓時間后,，即可切斷電源，在壓力降到0.5MPa,，可緩慢放出蒸氣,，應(yīng)注意不要使壓力降低太快，以致引起激烈的減壓沸騰,，使容器中的液體四溢,。當(dāng)壓力降到零后，才能開蓋,，取出培養(yǎng)基,，擺在平臺上，以待冷凝,。不可久不放氣,，引起培養(yǎng)基成分變化，以至培養(yǎng)基無法擺斜面 ,。一旦放置過久,，由于鍋爐內(nèi)有負壓，蓋子打不開,，只要將放氣閥打開,，大氣壓入，內(nèi)外壓力平衡,，蓋子便易打開了,。

  對高壓滅菌后不變質(zhì)的物品，如無菌水,、栽培介質(zhì),、接種用具，可以延長滅菌時間或提高壓力,。而培養(yǎng)基要嚴格遵守保壓時間,，既要保壓徹底，又要防止培養(yǎng)基中的成分變質(zhì)或效力降低,，不能隨意延長時間,。 操作步驟 1．首先將內(nèi)層滅菌桶取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水,，使水面與三角擱架相平為宜,。 2．放回滅菌桶，并裝入待滅菌物品,。注意不要裝得太擠,，以免防礙蒸汽流通而影響滅菌效果,。三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞,。 3．加蓋,，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)。再以兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺栓,，使螺栓松緊一致,，勿使漏氣。 4．用電爐或煤氣加熱,，并同時打開排氣閥,，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷空氣。待冷空氣完全排盡后,，關(guān)上排氣閥,，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當(dāng)鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時,，控制熱源,，維持壓力至所需時間。本實驗用 1．05kg/cm2,，121．3℃,，20分鐘滅菌。 5．滅菌所需時間到后,，切斷電源或關(guān)閉煤氣,，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當(dāng)壓力表的壓力降至0時,，打開排氣閥,，旋松螺栓，打開蓋子,，取出滅菌物品,。如果壓力未降到0時,，打開排氣閥,，就會因鍋內(nèi)壓力突然下降，使容器內(nèi)的培養(yǎng)基由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口,，造成棉塞沾染培養(yǎng)基而發(fā)生污染,。 6．將取出的滅菌培養(yǎng)基放入 37℃溫箱培養(yǎng)24小時，經(jīng)檢查若無雜菌生長,，即可待用,。