根據(jù)不同的篩選目的,采用不同的篩選模型,。如常規(guī)篩選抗生素產(chǎn)生菌的方法是將土壤中分離所得的純種,,在含有瓊脂培養(yǎng)基的平皿上培養(yǎng)后,用打孔器將菌塊移至含有試驗(yàn)菌的瓊脂培養(yǎng)基上,,在適宜的溫度下培養(yǎng)一定時(shí)間后取出,,如在菌塊的周?chē)型该鞯囊志Γ瑒t表明此菌種具有產(chǎn)生抑制試驗(yàn)菌生長(zhǎng)的抗菌物質(zhì)的能力,。所得菌種經(jīng)過(guò)搖瓶液體發(fā)酵,,測(cè)定發(fā)酵液或菌絲體內(nèi)抗生素的含量,選出生產(chǎn)能力高的菌種,。另一方面對(duì)所提取的抗生素進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析,、藥理試驗(yàn)及臨床試驗(yàn)等,確為有效者,,即可作為生產(chǎn)菌種,。又如篩選脂肪酶生產(chǎn)菌種的方法是將分離所得的霉菌涂布于含有牛脂的瓊脂培養(yǎng)基上,恒溫培養(yǎng)一定時(shí)間,,如菌落周?chē)霈F(xiàn)透明圈的,,則該菌具有分解脂肪的能力,進(jìn)一步作搖瓶發(fā)酵測(cè)定酶活力,,挑選產(chǎn)量高者作生產(chǎn)菌種的出發(fā)菌株,。菌種改良即采用遺傳育種的方法,使野生型菌株(從自然界分離篩選而得的出發(fā)菌株)的遺傳因子 DNA發(fā)生突變,、重組,,從而從中選出產(chǎn)量高、成品質(zhì)量好或具有新的培養(yǎng)特性如耐產(chǎn)物抑制,、能利用廉價(jià)原料以及具有生產(chǎn)新品種能力的優(yōu)良菌種,。采用的方法有誘變育種、雜交育種,、細(xì)胞融合技術(shù)和重組DNA技術(shù),。誘變育種是利用誘變因子如紫外線、鈷-60、乙烯亞胺類(lèi)等物理或化學(xué)誘變劑處理生產(chǎn)菌株的單孢子懸浮液,,以獲得誘發(fā)突變株,。隨后進(jìn)行突變株的篩選,從中篩選高產(chǎn)菌株,。由于隨機(jī)的突變?nèi)后w中,,有益突變所占比例很低,要獲得高產(chǎn)突變株必須進(jìn)行大量篩選,。近年來(lái),,隨著發(fā)酵代謝控制研究的發(fā)展,可根據(jù)生物合成途徑中的反應(yīng)點(diǎn),并通過(guò)它們的改變以提高產(chǎn)率或其他特性,如選育抗產(chǎn)物反饋抑制的突變株,、增加細(xì)胞透性的突變株及營(yíng)養(yǎng)缺陷型的突變株等,。這種"理性篩選法"廣泛應(yīng)用于氨基酸產(chǎn)生菌的選育。菌種制備也稱種子制備,,是指菌種在一定條件下,,經(jīng)過(guò)擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過(guò)程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用,。種子制備包括孢子制備和菌絲體制備(見(jiàn)圖),,其中(1)~(4)為孢子制備過(guò)程。保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種,,無(wú)菌操作挑取少許,,接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上,在25℃(或較高溫度)下培養(yǎng)5~7天(或較長(zhǎng)時(shí)間),。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子,,對(duì)于霉菌類(lèi)孢子制備,多數(shù)采用大米,、小米之類(lèi)的天然培養(yǎng)基,。將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液,接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上,,于25~28℃培養(yǎng)14天,。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,,并放入 4℃冰箱中備用,。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。放線菌孢子的培養(yǎng)基大多是采用麩皮或豌豆浸出液,、牛肉膏及無(wú)機(jī)鹽與瓊脂制成的,。將斜面孢子接入擴(kuò)大的扁瓶孢子培養(yǎng)基中,于28~37℃培養(yǎng)5~14天。所獲得的大量孢子可直接作為種子罐 (6)的種子,。如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子,,如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶(5)液體培養(yǎng)制得菌絲體,,作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽,、生長(zhǎng)、繁殖成大量菌體,。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米漿等),及無(wú)機(jī)鹽(如磷酸鹽)等,。作為發(fā)酵罐(7)的種子應(yīng)是生命力旺盛、染色深,、菌絲粗壯,無(wú)雜菌及異常菌體,。接種量一般在10%~20%。
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