1. 培養(yǎng)基的配制注意事項(xiàng)
植物組織培養(yǎng)最常用到MS培養(yǎng)基,，包含十幾種化合物,。因?yàn)橛行┗衔锵嘤鰰?huì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生沉淀，影響培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分,，準(zhǔn)備MS培養(yǎng)基需要配制多種高倍母液,。且配制母液時(shí)，尤其涉及大量元素的母液時(shí),，一定要等一種成分溶解之后,，再緩慢的添加另一種成分，切記“一鍋煮”,，即不能將各種化合物一齊添加進(jìn)去,。可選用Coolaber的MS培養(yǎng)基基鹽（PM1011）在自行加入蔗糖和瓊脂配制MS培養(yǎng)基，既經(jīng)濟(jì),，更高效,。
2. 滅菌后培養(yǎng)基不凝膠或者凝膠偏軟
植物凝膠、瓊脂都對(duì)酸性條件敏感,，pH值低于5很難成膠或凝膠偏軟,，切記高壓滅菌前調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH值（5.5-6.0）。植物凝膠對(duì)二價(jià)陽離子濃度有要求,，也就是相對(duì)于MS培養(yǎng)基,，1/2MS培養(yǎng)基中植物凝膠要適當(dāng)增加用量。另外滅菌后,，倒出培養(yǎng)基前一定將培養(yǎng)基搖勻（帶防燙手套）,，因?yàn)槭黔傊芏却蟮讓雍扛撸菀自斐膳囵B(yǎng)基強(qiáng)度不均勻,。選擇Coolaber改良MS培養(yǎng)基（PM10121,，pH5.8±0.2）含蔗糖和瓊脂/植物凝膠，可以省去調(diào)pH步驟,。
3. 水解酪蛋白有酸水解和酶水解之分,，在使用過程中有無區(qū)別？
水解酪蛋白對(duì)胚狀體,、不定芽的分化有良好的促進(jìn)作用,，通常用量在500mg/L，不管是酸解還是酶解,，作用都是一樣的,，酶解更有利于發(fā)揮其作用。
4. 怎么溶解組培常用植物激素,？
IAA,、IBA、GA、玉米素,、多效唑等應(yīng)先溶解于少量95%的乙醇中,，再加水定容配制成母液；如有結(jié)晶析出,，可考慮用1/10體積的乙醇溶解后再定容,；2，4-D易溶于堿性水溶液,，可用少量1mol/L的NaOH溶液溶解后再慢慢加水定容,；KT和6-BA先用少量的HCL溶解，再加水定容到一定的濃度,。
5. 細(xì)胞分裂素使用濃度,？
一般情況下在培養(yǎng)基中加入0.1~10.0mg/L的細(xì)胞分裂素（6-BA/KT/ZT)，多數(shù)用1.0~2.0mg/L,，KT濃度為0.5~2mg/L,，這個(gè)也要根據(jù)實(shí)驗(yàn)材料來調(diào)整。細(xì)胞分裂素可以單獨(dú)使用也可以與細(xì)胞生長(zhǎng)素配合使用,。
6. 哪些植物激素能高壓滅菌,，哪些不能高壓滅菌。
IBA,、NAA,、6-BA、2,4-D可高溫高壓滅菌,。 IAA,、GA3、茉莉酸等不可高溫高壓滅菌,，否則會(huì)分解失效,，該類植物激素配制母液后需用0.22微孔濾膜過濾除菌，待培養(yǎng)基冷卻（50-60℃）后尚未凝膠前加入混勻,。
7. 培養(yǎng)基的pH值會(huì)凝膠硬度有無影響,。
有影響。若將培養(yǎng)基pH值調(diào)的過高（大于6）,，則培養(yǎng)基偏硬，增加接種的阻力,，會(huì)對(duì)外植體造成損傷,。若將培養(yǎng)基pH值調(diào)的過低（小于4.5），則培養(yǎng)基不能凝固,，起不到固定外植體的作用,。一般將培養(yǎng)基的pH調(diào)節(jié)至5.5~6.0為宜。
8. 滅菌過程會(huì)否影響培養(yǎng)基的pH值？
培養(yǎng)基中的蔗糖和激素在高溫滅菌過程中容易酸化,，培養(yǎng)基pH值滅菌后會(huì)有所下降,，滅菌前培養(yǎng)基的pH值偏低可能導(dǎo)致培養(yǎng)基不凝或偏軟。要求偏酸性的培養(yǎng)基可適當(dāng)增加瓊脂或植物凝膠的用量,。
9. 應(yīng)用75%的酒精進(jìn)行種子消毒的過程中需要注意的問題
種子在消毒過程中使用75%的酒精使用應(yīng)慎重,，酒精滲透力極強(qiáng)，消毒時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)直接影響種子發(fā)芽率,，所以建議消毒時(shí)間不應(yīng)超過1min,。
10. 原始繁殖材料的消毒
組培中，作為原始繁殖材料的外植體消毒,，直接影響整個(gè)培養(yǎng)過程的進(jìn)行,。從室外采回來的外植體需進(jìn)行消毒，首先用自來水沖洗外植體,，沖洗時(shí)間可根據(jù)采集部位不同而定,，一般在5~15分鐘即可,；關(guān)鍵在于在超凈臺(tái)中進(jìn)行藥劑的處理,，常用的藥劑處理有70%的乙醇溶液、9%的次氯酸鈉溶液,、和0.1~0.2%的升汞溶液,，具體可根據(jù)實(shí)驗(yàn)材料而定,。應(yīng)注意的是經(jīng)升汞滅菌的外植體必須用無菌水沖洗6~8次。
11. 怎么處理植物組織培養(yǎng)過程中出現(xiàn)的各種污染,？
植物組織培養(yǎng)過程中的污染來源主要分為3種,，真菌、細(xì)菌和組織培養(yǎng)過程中的污染源,。在操作過程中,，難免有菌落入培養(yǎng)基或植物材料上，而導(dǎo)致污染,。另外,，不正確操作也會(huì)增加污染機(jī)率。預(yù)防措施：通風(fēng),，保持室內(nèi)空氣干燥,，紫外殺菌等。污染物品和污染培養(yǎng)基不要在培養(yǎng)室近距離開瓶洗刷,。
污染原因判斷：
（1）培養(yǎng)基污染 若污染菌類是零星分散在培養(yǎng)基中,，則可確定是人為引起的污染。比如培養(yǎng)基滅菌不徹底,，開瓶時(shí)間過長(zhǎng),，滅菌后存放時(shí)間過長(zhǎng)等,； 高溫蒸汽滅菌器的溫度、壓力,、時(shí)間沒有正確設(shè)置,；過濾滅菌過程中濾膜孔徑選擇、過濾滅菌器的滅菌處理,、過濾滅菌操作等均會(huì)影響培養(yǎng)基的滅菌效果,。
措施：嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)要求，滅菌規(guī)程操作,。
（2）外植體污染 若污染菌類是從材料周圍長(zhǎng)起,，且發(fā)生在5天以后，則說明是材料帶的內(nèi)生菌,?？赡苁墙臃N用具滅菌不徹底，接種時(shí)材料被污染,；若從培養(yǎng)基以下開始長(zhǎng)菌,，發(fā)生時(shí)間較早，且有從里向外的趨勢(shì),，則說明是切口引起的污染,，原因可能是未剪去兩個(gè)切口或者雖剪去切口但是所用器具帶菌；或者是未及時(shí)發(fā)現(xiàn)污染苗,，接種過程中引起交叉污染,；
措施：取材時(shí)應(yīng)仔細(xì)選擇，以減少污染的發(fā)生,。
（3）操作環(huán)節(jié)污染 接種室是否清潔,、干燥、密封,，是否經(jīng)常用紫外燈照射,、甲醛熏蒸、70%的酒精噴霧殺菌等,；超凈工作臺(tái)擺放物品雜亂,，長(zhǎng)時(shí)間不換濾網(wǎng)，導(dǎo)致凈化能力降低,；接種用具滅菌不徹底引起污染,；操作不正確等。
措施：每次接種前半個(gè)小時(shí),，用20%的新潔爾擦洗室內(nèi)設(shè)備,、工作臺(tái)面，再用紫外燈照射20min,。還可以噴灑70%的乙醇進(jìn)行消毒。除了培養(yǎng)基、接種材料,、器具和用具保證無菌外,，同時(shí)在接種時(shí)還需要嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作。
出現(xiàn)污染后處理措施：
（1）真菌污染后,，如果已形成孢子,，則必須經(jīng)高壓滅菌后扔掉；若使細(xì)菌污染,，只要及時(shí)發(fā)現(xiàn),，將材料上部未感染菌的部分剪下轉(zhuǎn)接，材料仍可以用,。
（2）用抗生素等殺菌藥劑的處理,。但至今還未發(fā)現(xiàn)哪種抗生素能夠?qū)Ω鞣N菌都有效，并且常常也會(huì)影響植物材料的正常生長(zhǎng)分化,。另一些藥劑,，雖有的殺菌效果好，但往往容易引起鹽害,，也無法利用,。
12. 外植體的選擇
為了使接種后的誘導(dǎo)得以成功，選擇的外植體應(yīng)該是幼嫩的,，處于生長(zhǎng)旺盛時(shí)期的,，而且選擇的外植體的體積不能過小，如若過小則會(huì)影響愈傷組織的形成,，從而影響進(jìn)一步的分化,。因此，一般接種的外植體體積在0.5~1.0cm2的范圍內(nèi)即可,。最適的為莖尖,、帶芽莖段，也可以利用葉子,、子葉,、根段、花器官組織等,。
13. 植物莖段組織培養(yǎng)需要注意哪些問題
以莖段進(jìn)行組織培養(yǎng)比較容易,，一般取植物的嫩莖切段作為外植體，切成0.5~1cm長(zhǎng)的小段進(jìn)行接種,，保證每個(gè)莖段有一個(gè)芽點(diǎn)和一片葉子,，將芽點(diǎn)部位以下垂直插入培養(yǎng)基凝膠中進(jìn)行生根培養(yǎng)。
14.外植體接種需要注意的操作事項(xiàng)
接種前首先進(jìn)行滅菌消毒,，接種所用的鑷子,、解剖刀,、剪刀等工具需要提前高溫高壓滅菌，提前10分鐘打開超凈工作臺(tái),，滅紫外15~20min,，操作人員要用75%的酒精棉球擦手、工作臺(tái)和器皿,，解剖刀和鑷子等隨時(shí)擦酒精灼燒,，晾涼后備用。在無菌培養(yǎng)皿中或?yàn)V紙上切割外植體,，接種到培養(yǎng)基表面,，注意瓶口傾斜接近酒精燈火焰。
15. 組織培養(yǎng)中材料褐化現(xiàn)象
不同品種以及生理狀態(tài)引起的褐化狀態(tài)不同,。培養(yǎng)基過高濃度的無機(jī)鹽及高水平細(xì)胞分裂素會(huì)使褐化現(xiàn)象加重,。培養(yǎng)條件不當(dāng)，例如光照過強(qiáng),、溫度過高,、培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)等，均可使多酚氧化酶的活性提高,，從而加重外植體的褐變程度,。
防治措施：選擇合適的外植體。選擇生長(zhǎng)處于旺盛的外植體,，可以使褐變現(xiàn)象明顯減輕,。合適的培養(yǎng)條件，無機(jī)鹽成分,、植物生長(zhǎng)物質(zhì)水平,、適宜溫度、及時(shí)繼代培養(yǎng)均可以減輕材料的褐變現(xiàn)象,。使用抗氧化劑,，在培養(yǎng)基中，使用半胱氨酸,、抗壞血酸,、PVP等抗氧化劑能夠較為有效地避免或減輕很多外植體的褐變現(xiàn)象。另外使用0.1%~0.5%的活性炭對(duì)防止褐變也有較為明顯的效果,。連續(xù)轉(zhuǎn)移,，對(duì)容易褐變的材料可間隔12~24小時(shí)的培養(yǎng)后，再轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基上,，這樣經(jīng)過連續(xù)處理7~10天后,，褐變現(xiàn)象便會(huì)得到控制或大為減輕。
16. 材料玻璃化問題
植物材料不斷地進(jìn)行離體繁殖時(shí),，有些培養(yǎng)物的嫩莖,、葉片往往會(huì)呈半透明狀,，呈水跡狀，這種現(xiàn)象通常稱為玻璃化,。玻璃化為試管苗的生理失調(diào)癥,，試管苗生長(zhǎng)緩慢、玻璃化的嫩莖不宜誘導(dǎo)生根,，繁殖系數(shù)有所下降。當(dāng)培養(yǎng)基上細(xì)胞分裂素水平較高時(shí),，容易出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象,。愈傷組織的玻璃化問題主要表現(xiàn)在培養(yǎng)過程中愈傷組織松散，脆易碎,。葉子或是長(zhǎng)出的愈傷一段時(shí)間后在其周圍出現(xiàn)水漬化,，繼而影響整個(gè)培養(yǎng)基。
防治措施: 在培養(yǎng)基中添加少量聚乙烯醇,、脫落酸等物質(zhì),，降低培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素含量及含氮化合物的用量，選用低NH4+水平的B5培養(yǎng)基,，都能夠在一定程度上減輕玻璃化的現(xiàn)象發(fā)生,。增加光照，對(duì)減輕試管苗玻璃化的現(xiàn)象有明顯的作用,；在培養(yǎng)基中添加活性炭,、馬鈴薯汁、間苯三酚等可有效的減輕和防止玻璃化,。
17. 材料水浸狀,、變色、壞死,、莖斷面附近干枯
可能原因：表面殺菌劑過量,，消毒時(shí)間過長(zhǎng)，外植體選用不當(dāng)（部位或時(shí)期）,。
改進(jìn)措施：調(diào)換其他殺菌劑或降低濃度,，縮短消毒時(shí)間，試用其他部位,，生長(zhǎng)初期取材,。
18. 材料長(zhǎng)期培養(yǎng)幾乎無反應(yīng)
可能原因：培養(yǎng)基不適合，生長(zhǎng)素的選擇和用量不當(dāng),，植物激素對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育和生理過程的調(diào)節(jié)作用,，往往不是某一種植物激素的單獨(dú)效果。環(huán)境溫度不適宜,。
改進(jìn)措施：更換培養(yǎng)基或調(diào)整培養(yǎng)基成分,，尤其是調(diào)整鹽離子濃度,；調(diào)整激素的種類與配比，增加生長(zhǎng)素用量,，例如使用人工合成的生長(zhǎng)素類似物2,，4-D等可有效促進(jìn)細(xì)胞分裂和伸長(zhǎng)，新器官的分化和形成,；調(diào)整培養(yǎng)溫度等環(huán)境條件,。
19. 愈傷組織生長(zhǎng)過旺疏松
可能原因： 由于培養(yǎng)基中激素添加過量，培養(yǎng)室溫度偏高,，礦物質(zhì)等無機(jī)鹽含量不當(dāng)?shù)纫蛩匾鸬摹?/span>
改進(jìn)措施：根據(jù)不同的品種,、不同組織、不同器官,，應(yīng)適當(dāng)減少激素用量,，適當(dāng)降低培養(yǎng)溫度，調(diào)整無機(jī)鹽（尤其是銨鹽）含量,，適當(dāng)提高瓊脂用量增加培養(yǎng)基硬度,，避免愈傷組織生長(zhǎng)過旺和疏松現(xiàn)象發(fā)生。
20. 愈傷組織生長(zhǎng)緩慢太緊密
可能原因：細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素的用量過多,，糖濃度過高,。
改進(jìn)措施：減少細(xì)胞分裂素用量，調(diào)整細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素比例,，降低糖濃度,。
21. 愈傷組織分化率低，畸形,，分化出的芽多為葉狀芽或叢芽,，芽生長(zhǎng)困難，不易成苗,。培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)時(shí),，再次愈傷組織化
可能原因：生長(zhǎng)素用量偏高，溫度偏高,。
改進(jìn)措施：減少生長(zhǎng)素用量,，可以通過分化培養(yǎng)時(shí)在培養(yǎng)基中添加GA3（濃度在0.5~2mg/L之間）解決，并適當(dāng)降低愈傷組織的培養(yǎng)溫度,。
22 叢生苗過于細(xì)弱,，不適于生根或移栽
可能原因：細(xì)胞分裂素濃度過高或赤霉素使用不當(dāng)，產(chǎn)生過多的不定芽,；溫度過高,，光照短，光強(qiáng)不足；不及時(shí)的轉(zhuǎn)移和分切,，生長(zhǎng)空間小,。
改進(jìn)措施：減少細(xì)胞分裂素用量，免用赤霉素,；延長(zhǎng)光照時(shí)間,，增強(qiáng)光照；及時(shí)轉(zhuǎn)接,；降低接種密度,；更換透氣的封口膜等。
23. 組織培養(yǎng)過程中出現(xiàn)黃化
引起黃化的主要原因是培養(yǎng)基中Fe的含量不足,，各種礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不均衡,；培養(yǎng)環(huán)境通氣不良，瓶?jī)?nèi)有害氣體積累（乙烯,、氨氣、甲醛）等會(huì)引起植物材料黃化脫落,；激素配比不當(dāng),；糖用量不足或長(zhǎng)時(shí)間不轉(zhuǎn)移；pH值變化過大,；培養(yǎng)溫度不適,；光照不足等。
改進(jìn)措施：改善組培條件,，在配制培養(yǎng)基過程中檢查儀器設(shè)備是否準(zhǔn)確,；降低組培苗的接種密度，及時(shí)轉(zhuǎn)接培養(yǎng)物,；使用透氣的封口膜改善瓶?jī)?nèi)通氣狀況,；適當(dāng)調(diào)節(jié)pH值、激素配比和無機(jī)鹽濃度,；控制培養(yǎng)室內(nèi)溫度,，適當(dāng)增加光照。
24. 植物組培培養(yǎng)基都有哪些,？
MS培養(yǎng)基：1962年穆拉辛格和斯庫(kù)格為煙草細(xì)胞培養(yǎng)而設(shè)計(jì),，其中硝酸鹽的濃度高，適合植物原生質(zhì)體,、細(xì)胞和組織培養(yǎng),。
B5培養(yǎng)基：1968年甘伯爾格為大豆細(xì)胞培養(yǎng)而設(shè)計(jì)，銨的濃度低,。適合木本植物的組織和細(xì)胞培養(yǎng),。
富鹽平衡培養(yǎng)基：是目前使用最廣泛的一類，特點(diǎn)是：無機(jī)鹽濃度高,，微量元素種類齊全,，濃度高,；元素間比例適當(dāng)，離子平衡性好,，具有較強(qiáng)的緩沖能力,、穩(wěn)定性好、營(yíng)養(yǎng)豐富,，一般培養(yǎng)時(shí)無需再加入有機(jī)成分,。
高硝態(tài)氮培養(yǎng)基：代表性培養(yǎng)基有B5、N6,、SH,。特點(diǎn)是：硝酸鉀濃度高，氨態(tài)氮濃度低,，含有較高濃度的硫胺素（VB1）,。
中鹽培養(yǎng)基：大多是在MS培養(yǎng)基基礎(chǔ)上進(jìn)行改良設(shè)計(jì)。特點(diǎn)是：大量元素?zé)o機(jī)鹽為MS的一半,，微量元素種類減少,、含量增高。維生素種類比MS增多,，例如增加了生物素,、葉酸等。
低鹽培養(yǎng)基：特點(diǎn)是：無機(jī)鹽,、有機(jī)成分含量濃度低,，多用作生根培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
更多培養(yǎng)基參見www.coolaber.com.
25. 木本植物（油料植物）組織培養(yǎng)中遇到再生苗無法生根時(shí)怎么辦,？
一般常用的1/2MS或者1/2WPM基本能夠滿足,。如果增殖用的基本都生產(chǎn)正常，到生根的時(shí)候出現(xiàn)落葉,，只能通過排除法一樣樣分析,。首先看下是不是培養(yǎng)溫度太高，使用瓶蓋后透氣性差,，導(dǎo)致乙烯積累,。其次，可以適當(dāng)添加少量分裂素,，或者更換生長(zhǎng)素,，以及多種生長(zhǎng)素混合使用。
26. 培養(yǎng)基中添加糖類作為碳源物質(zhì),，有何重要作用,？
同樣作為碳源為植物細(xì)胞提供能量來源，蔗糖較葡萄糖能更好地調(diào)節(jié)培養(yǎng)基內(nèi)的滲透壓。微生物生長(zhǎng)所需的碳源最常用的是葡萄糖,，采用蔗糖作為培養(yǎng)基的碳源,，可一定程度上減少微生物的污染。生長(zhǎng)素和蔗糖濃度決定愈傷組織中維管束的類型與數(shù)量,。
27. 用于植物原生質(zhì)體制備的材料,，以及常用的滲透壓調(diào)節(jié)劑
用于植物原生質(zhì)體的材料需要選取生長(zhǎng)旺盛的細(xì)胞，幼嫩的組織,。無菌試管苗的葉片,、胚軸及子葉、花藥,，以及愈傷組織（懸浮細(xì)胞）等,。常用的調(diào)節(jié)原生質(zhì)體滲透壓的穩(wěn)定劑主要有甘露醇、山梨醇,、葡萄糖,、蔗糖等。滲透壓濃度一般為0.3~0.8 mol/L,。
28. 組培苗移栽需要注意的問題
在移栽前打開三角瓶的封口膜,，煉苗3~5d后取出小苗，用流水洗凈根部的培養(yǎng)基,，然后移栽到盛有滅過菌的蛭石的營(yíng)養(yǎng)缽中過度一下，但要注意不可直接向營(yíng)養(yǎng)缽中澆營(yíng)養(yǎng)液（容易長(zhǎng)菌）,，用透明的塑料薄膜罩住小苗3~5d后移栽到土里,。
29. 光照強(qiáng)度多少lux是如何計(jì)算的
光照強(qiáng)度=光通量/單位面積。Lux的換算比較抽象,，一般以燭光為計(jì)算單位,，現(xiàn)在所用的以電源發(fā)光的光源，記作國(guó)際燭光,，即25瓦特的電燈其光強(qiáng)度等于25國(guó)際燭光,。1標(biāo)準(zhǔn)燭光=10.76 Lux。
30. LED光源在植物組織培養(yǎng)中的選擇
光是植物生長(zhǎng)中最重要的環(huán)境因子之一,，并不是所有的光都有助于植物的光合作用,。LED光源460nm左右的藍(lán)光和660nm左右的紅光是植物最需要的光波，對(duì)植物的生長(zhǎng)發(fā)育起著關(guān)鍵性的作用,。
精選材質(zhì)
產(chǎn)品經(jīng)久耐用
精心制造
讓您用的省心放心
售后完善
讓您無后顧之憂
新聞詳情
新聞中心
聯(lián)系我們
聯(lián)系電話：0536-6187257
聯(lián)系電話：19905360788
公司地址：山東省濰坊市諸城市南湖區(qū)工業(yè)園環(huán)湖東路188號(hào)